FIREFLYGLO螢火蟲螢光素酶報告基因檢測試劑盒說明書

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產品詳情

產品描述

FIREFLYGLO   螢光素酶報告基因檢測系統是一種輝光型定量檢測試劑盒，具有高靈敏度和發光信號穩定的特點，可以滿足高通量檢測螢光素酶在哺乳動物細胞中的表達。相對于云賀閃光型Firefly Luciferase Reporter Assay Kit ， 本品FIREFLYGLO Luciferase Reporter Assay Kit （YH0046）具有以下優點：采用了一種全新的螢光素酶檢測底物，提高了發光信號的穩定性，近乎2 小時的信號半衰期為實驗設計提供了更大的靈活性；采用加樣-混勻-檢測的操作方法，無需依賴自動進樣器，并且無需棄培養液、離心等步驟，簡化了實驗流程；本試劑盒組分做了大量優化，與傳統閃光型產品相比，無明顯刺激性氣味。FIREFLYGLO 螢光素酶報告基因檢測試劑盒可用于多種常用細胞培養液：RPMI1640 、DMEM 、MEM- α、 F12 、DMEM/F12 等，其半衰期均為2 小時左右（22℃），滿足絕大多數高通量實驗需求。

注意事項

1 、檢測儀器選擇：能夠檢測化學發光的儀器都適用本試劑盒的檢測，但是針對相同的樣品，不同檢測器本底信號值和測量值均可能不同； 且對于同一樣本檢測，不同儀器的數值不可橫向比較。為防止孔間干擾， 推薦使用不透明白色細胞培養板。

2 、由于發光信號會受到檢測環境如培養基組分、溫度等影響，所以應確保同組內不同樣本檢測條件一致。

3 、酶促反應對溫度較為敏感，加樣檢測前務必將檢測試劑以及細胞培養板平衡至室溫。

4 、為保證螢光素酶檢測試劑穩定性， 適量分裝后建議-70℃長期避光保存或者短期存放于-20℃不超過一個月，并盡快使用，盡量避免多次反復凍融。

5、如需同時檢測多個細胞培養板，請盡量確保每個細胞板加入檢測溶液后孵育時間一致，再進行數據讀取，以此獲得最佳的檢測結果。

使用方法

使用方法

自備材料：

PBS；多道排槍；白色不透光細胞培養板；化學發光儀或酶標儀。

檢測前準備

1） 開始使用時將 FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer 一次性全部倒入 FIREFLYGLO Luciferase Substrate 瓶中，充分混勻后，按使用需求進行分裝，建議-70℃長期保存或者短期存放于-20℃不超過一個月，并盡快使用。

2） 每次實驗前將分裝后凍存的檢測試劑平衡至室溫。

操作方法

1） 從細胞培養箱中取出細胞培養板，放置 5-15min，恢復至室溫。注：使用白色不透光的細胞培養板，減少孔間的信號干擾。

2） 加入檢測溶液

使用多道排槍向每個細胞孔中加入平衡至室溫的含有底物的FIREFLYGLO Luciferase Reaction Buffer ， 加樣體積與細胞培養液體積相同。例如， 96 孔板通常加入 80-100ul 培養液，相應加入 80ul-100ul 檢測溶液； 384 孔板通常加入 20-30ul 培養液，相應加入 20-30ul 檢測溶液。

3） 振蕩混勻

為了使得細胞裂解充分，建議將細胞培養板放在振蕩混勻儀或附帶振板功能的儀器上，室溫條件下， 采用 中高速振板 5-10min。

注：建議振板混勻時間為 5-10min，可根據細胞量進行適當調整，確保細胞充分裂解，得到穩定的發光檢測結果。

4） 檢測

振板混勻后于化學發光儀或酶標儀中檢測Firefly Luciferase 報告基因活性。注：為得到最佳檢測結果，請在加入檢測試劑后 2 小時內完成檢測。